Peptid- und Proteinaufreinigung sind ein mitunter schwieriger Bestandteil in Proteomik-Workflows. Zu den Aufreinigungsmethoden gehören die Affinitäts-, Ionenaustausch-, Größenausschluss- (oder Gel-Permeations-) und Reversed-Phase-Chromatographie sowie die Gelfiltration. Die am häufigsten verwendete Methode bei der Detektion ist die UV-VIS-Spektrometrie, aber auch die Fluoreszenz- und Massenspektrometrie können eine weitere Dimension beisteuern. Zusätzlich zu den säulenbasierten Techniken können Proteine und Peptide auch mithilfe von funktionalisierten oder magnetischen Kügelchen, sogenannten Beads, aufgereinigt werden. Gilson bietet eine Reihe von Geräten an, die alle diese Techniken abdecken.
Fallstudie: Hilfe bei der Produktionssteigerung der Peptidaufreinigung in der Arzneimittelforschung
Das Institut für Forschung und Innovation in der Biomedizin (Institute for Research and Innovation in Biomedicine, IRIB) in der Normandie, Frankreich, konzentriert sich auf die Entwicklung innovativer Technologien zur Diagnose, Behandlung und Vorbeugung von Krankheiten. In dieser Fallstudie untersuchen wir, wie die IRIB-Forscher die präparative HPLC in ihren Anwendungen zur Peptidaufreinigung eingesetzt haben, um ihre Produktion zu vergrößern.
Die Entsalzung von Peptiden vor der LC-MS-Analyse (Liquid Chromatography-Mass Spectrometry) ist ein entscheidender Schritt bei der Probenvorbereitung in der Proteomik. Bei diesem Verfahren werden Salze und andere Verunreinigungen entfernt, die die LC-MS-Analyse beeinträchtigen könnten, wodurch eine höhere Empfindlichkeit und eine bessere Datenqualität gewährleistet werden. Eine der am häufigsten verwendeten Methoden zur Entsalzung von Peptiden ist die Festphasenextraktion (SPE) und dieses ASPEC-System bietet die ultimative Einsatzflexibilität, indem es flexible Überdruck-SPE, präzises Liquid Handling, große Ladekapazität und die optionale Direkteinspritzung in KC-Systemen® kombiniert. Es ermöglicht pro Tag die unbeaufsichtigte Verarbeitung einer großen Anzahl von Proben für die Peptidaufreinigung und ist damit eine effektive, automatisierte Alternative zu den StageTip-basierten manuellen Methoden.
Das Single-Quad-Massenspektrometer VERITY 1920 ist ideal für Labore, die eine effektive MS-Detektion zur Isolierung reiner Verbindungen suchen. Das vielseitige VERITY 1920 MS kann Ionenquellen mit Elektrospray-Ionisierung (ESI) oder chemischer Ionisierung bei Atmosphärendruck (APCI) nutzen und bietet so eine hohe Anwendungsflexibilität. Der Detektor kann mit verschiedenen Aufreinigungssystemen von Gilson kombiniert werden und reinigt selektiv Wirkstoffe von kleinen bis zu großen Molekülen und Naturprodukten vom Labor- bis zum Pilotmaßstab.
Das VERITY® 271 LCMS-System kombiniert die höhere Selektivität der Massendetektion, mit der Vielseitigkeit eines Aufbaus für die semi-präparative bis präparative HPLC-Aufreinigung mittelgroßer Kapazität. Alle Konfigurationen bieten neuartige Injektions- und Fraktionssammelfunktionen auf einer einzigen Arbeitsplattform, wobei das VERITY® 1920 Massenspektrometer mit Elektrospray-Ionisation (ESI) oder chemischer Ionisation unter Atmosphärendruck (APCI) ausgestattet ist. Dies ist ideal für die Peptidaufreinigung und für Labore, die einen effektiven MS-Nachweis suchen, um reine Verbindungen aus synthetischen und natürlichen Produkten vom Labor- bis zum Pilotmaßstab zu isolieren.
Der zuverlässige und vielseitige UV-VIS-Detektor VERITY 1741 wurde für die semipräparative bis präparative Aufreinigung entwickelt. Er ist mit der leistungsstarken Scanning-Detektion mit mehreren Wellenlängen gekoppelt und ermöglicht so eine aussagekräftigere Informations- und Datenerfassung bei geringeren Betriebskosten. Mit der Möglichkeit, mehrere verschiedene Wellenlängen gleichzeitig zu scannen, bietet der VERITY 1741-Detektor die für eine Vielzahl von Aufreinigungsanwendungen erforderliche Detektionsspezifität.
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